咖啡因是一種植物生物鹼,能在許多植物中發現。作為自然殺蟲劑,它能使吞食含咖啡因植物的昆蟲麻痹[9]。人類最常使用的含咖啡因的植物包括咖啡、茶及一些可可。其他不經常使用的包括一般被用來制茶或能量飲料的巴拉圭冬青[10]和瓜拿納樹。兩個咖啡因的別名:馬黛因[11]和瓜拿納因子[12]就是從這兩種植物演化而來。
世界上最主要的咖啡因來源是咖啡豆(咖啡樹的種子),同時咖啡豆也是咖啡的原料。咖啡中的咖啡因含量極大程度上依賴於咖啡豆的品種和咖啡的製作方法[13],甚至同一棵樹上的咖啡豆中的咖啡因含量都有很大的區別。一般來說一杯咖啡中咖啡因的含量從阿拉伯濃縮咖啡中的40毫克到濃咖啡中的100毫克。深焙咖啡一般比淺焙咖啡的咖啡因含量少,因為烘焙能減少咖啡豆裡的咖啡因含量。阿拉伯咖啡的咖啡因含量通常比中果咖啡低[13]。咖啡也含有痕量的茶鹼,但不含可可鹼。
茶是另外一個咖啡因的重要來源,每杯茶的咖啡因含量一般只有每杯咖啡的一半,這與制茶工藝有關。特定品種的茶,例如紅茶和烏龍茶,比其他茶的咖啡因含量高。茶含有少量的可可鹼以及比咖啡略高的茶鹼。茶的製作對於茶有很大影響,但是茶的顏色幾乎不能指示咖啡因的含量[14]。日本綠茶的咖啡因含量就遠遠低於許多紅茶(例如正山小種茶),幾乎不含咖啡因。
由可可粉製的巧克力也含有少量的咖啡因。巧克力是一種很弱的興奮劑,主要歸因於其中含有的可可鹼和茶鹼[15]。一條典型的28克牛奶巧克力與脫咖啡因咖啡的咖啡因含量差不多。

咖啡因也是軟飲料中的常見成分,例如可樂,最初就是由可樂果製得。一瓶軟飲料中一般含有10毫克至50毫克的咖啡因。能量飲料,例如紅牛,每瓶含有80毫克咖啡因。這些飲料中的咖啡因來源於它們所用的原始成分或由脫咖啡因咖啡所得的添加劑,也有是通過化學合成的。瓜拿納,很多能量飲料的基本成分,含有大量的咖啡因及少量的可可鹼。自然存在的緩釋賦形劑中含有少量茶鹼[
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